本產(chǎn)品是采用 SYBR Green I 嵌合熒光法進(jìn)行Real Time PCR的專用試劑，將熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶、dNTP、SYBR Green I等試劑預(yù)混成即用的2x Mix，可對(duì)目標(biāo)cDNA進(jìn)行快速并具有高特異性的定量檢測(cè)。本產(chǎn)品采用化學(xué)修飾的Hot Start Taq DNA聚合酶，在 50 ℃以下無(wú)活性，只有 95 ℃條件下加熱后才能完全恢復(fù)酶的活力，最大限度減少非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)生，提高熒光定量PCR反應(yīng)的精確性。該試劑盒獨(dú)特的反應(yīng)緩沖液，可在寬范圍中得到良好的擴(kuò)增結(jié)果、檢測(cè)靈敏度更高、信號(hào)更強(qiáng)。

產(chǎn)品組分：

保存條件：

收到本產(chǎn)品后，請(qǐng)立即置于-20℃避光保存，一年有效，2～8℃條件下儲(chǔ)存6個(gè)月，避免反復(fù)多次凍融。

使用說(shuō)明：

一、配制 Real-Time PCR反應(yīng)體系：

1、將所有試劑2×SYBR Green qPCR Mix，ROX Reference Dye，模板，引物和RNase-Free ddH₂O，在室溫下融解并徹底混勻，避免產(chǎn)生氣泡。短暫離心后，置于冰上按照下表配制反應(yīng)液。

參考下表配制反應(yīng)體系：

* 一般來(lái)說(shuō)反應(yīng)體系中引物終濃度為0.2 uM即可得到較好的擴(kuò)增效果。當(dāng)反應(yīng)性能比較差時(shí)，可以在終濃度0.2~0.4 uM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。

** 幾種常見(jiàn)儀器的最適ROX Reference Dye濃度見(jiàn)下表：

2、蓋上或密封反應(yīng)管/PCR板，輕輕混勻。短暫離心，確保所有組分都在管/板底。

二、進(jìn)行Real-Time PCR反應(yīng)

1、建議采用兩步法PCR反應(yīng)程序進(jìn)行反應(yīng)。

兩步法反應(yīng)程序:

若模板量較低等因素導(dǎo)致擴(kuò)增效果不佳，可使用三步法程序進(jìn)行PCR反應(yīng)。

三步法反應(yīng)程序:

2、上機(jī)檢測(cè)：將反應(yīng)體系置于熒光定量 PCR 儀中，運(yùn)行程序收集數(shù)據(jù)并分析結(jié)果。