紅細(xì)胞裂解液

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

紅細(xì)胞裂解液是一種用于從人或鼠等的血液或組織樣品中裂解并去除無(wú)細(xì)胞核紅細(xì)胞的溶液。經(jīng)過(guò)優(yōu)化配方，在裂解紅細(xì)胞的同時(shí)幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。主要有效成分為氯化銨。不適用于有細(xì)胞核紅細(xì)胞的裂解，例如鳥(niǎo)或禽類(lèi)的紅細(xì)胞。已經(jīng)過(guò)無(wú)菌處理，處理過(guò)的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測(cè)。

使用說(shuō)明：

對(duì)于組織細(xì)胞樣品：

1、新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理，通過(guò)適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液，離心棄上清。

2、加入3-5倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。例如細(xì)胞沉淀的體積為1ml，則加入3-5ml的紅細(xì)胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。

3、400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。

5、洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500g離心2-3分鐘，棄上清。可再重復(fù)1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

對(duì)于組織細(xì)胞樣品無(wú)需洗滌的快速操作步驟：

1、新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理，通過(guò)適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液，離心棄上清。

2、對(duì)于0.2ml細(xì)胞沉淀加入1ml紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。

3、加入15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，混勻。

4、400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

5、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

說(shuō)明：對(duì)于常規(guī)步驟，多一步洗滌過(guò)程中的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時(shí)不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時(shí)需要大體積的離心管。

對(duì)于血液樣品：

1、取新鮮抗凝血，400-500g離心5分鐘，離心棄上清。

2、加入6-10倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。例如細(xì)胞沉淀的體積為1ml，則加入6-10ml的紅細(xì)胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對(duì)于鼠的血液，裂解1-2分鐘已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至4-5分鐘，并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。

3、 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。

5、洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500g離心2-3分鐘，棄上清?？稍僦貜?fù)1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意：對(duì)于微量或少量的血液樣品，可在第一步中不進(jìn)行離心棄上清的操作，直接在第

二步中加入10倍血液體積的紅細(xì)胞裂解液，并在室溫或4℃裂解4-5分鐘。對(duì)于鼠的血液，裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至10分鐘，但通常不宜超過(guò)15分鐘，并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。后續(xù)步驟相同。

對(duì)于血液樣品無(wú)需洗滌的快速操作步驟：

1、每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4-5分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對(duì)于鼠的血液，裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至10分鐘，但通常不宜超過(guò)15分鐘，并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。

2、加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，混勻。

3、 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。

5、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意：對(duì)于常規(guī)步驟，多一步洗滌過(guò)程的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時(shí)不需要大體積的離心管?？焖俨襟E少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時(shí)需要大體積的離心管。

注意事項(xiàng)：

1、本裂解液為無(wú)菌產(chǎn)品，請(qǐng)注意保持無(wú)菌，使用本產(chǎn)品時(shí)宜在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。

2、 如果經(jīng)過(guò)紅細(xì)胞裂解液處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取，在處理細(xì)胞時(shí)不必使用經(jīng)過(guò)DEPC處理過(guò)的溶液。

3、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

保存條件：

4℃保存，一年有效。室溫保存，3個(gè)月有效。